细菌冷冻干燥机操作

    细菌冷冻干燥机顾名思义是一种用于细菌、菌种、微生物等冻干保存的真空冷冻干燥机，也常常被称为细菌冻干机、菌种冷冻干燥机、微生物冷冻干燥机。其操作步骤如下：

一、菌株准备及分装

    液体培养的菌种，经离心收集和用生理盐水洗涤细胞，收集的菌体用保护剂（10ml脱脂牛奶中加1g米孢子粒）悬浮制成菌悬浮液。悬液中菌数要求达到108-1010个/ml为宜。悬液制备完成尽快分装和冻结。分装安瓿时可用灭菌长嘴毛吸管或长针注射器，每管分装量约0.1-0.2ml（0.3-0.5ml，单管式冷冻管球形装液区内的装液量应为球体积的一半左右），分装安瓿管时间尽量要短，在1-2小时内分装完毕并且预冻，分装时应注意在无菌条件下操作。

二、预冻

    置于-80℃超低温冰箱预冻1-2小时（也可直接选购-80℃低温实验室冷冻干燥机）。

三、 冷冻干燥

1. 将冷冻后的样品安瓿管置于细菌冷冻干燥机上（先开机预冷30分钟以上才开泵），开始冷冻干燥，时间一般为数小时。终止干燥时间应该根据以下情况判断：安瓿管内冻干物呈酥块状或者松散状；真空度接近空载时的zui高值；选用1-2支对照管，其水份与菌悬液同量，视为干燥完结。（注意：确认干燥后，要先开启冷冻室的进气阀，让真空释放，然后停泵，打开冷冻室，将冷冻干燥管取出。）

2. 真空封口

将安瓿管颈部棉塞以下处用强火焰拉细进行熔封。

四、 保藏

   安瓿管保藏在-20℃超低温冰箱中。

五、 活化

    如果要从中取出菌种恢复培养，可先用75%酒精将管得外壁消毒，用无菌棉签沾冷水，在顶部擦一圈，顶部出现裂纹，用挫刀或镊子颈部轻叩一下，敲下已开裂的安瓿管的顶端，，在安瓿管中加入0.5-1ml液体培养基，慢慢旋转安瓿管，使冻干菌种复苏，然后直接接种到琼脂斜面或涂布平板。

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