细胞冻存程序降温仪介绍与步骤

 细胞冻存程序降温仪介绍与步骤！

    在细胞培养检测实验在实验仪器、培养基等等工作上都要耗费不少的人力和体力。好在很久以前就有高人发明了细胞保存这个实验步骤，将暂时多出来的细胞冰冻保存，以zui大程度保存细胞活力。

一、细胞冷冻保存
1.  材料：
生长良好之培养细胞、新鲜培养基、DMSO (Sigma D-2650)、无菌塑料冷冻保存管(Nalgene　5000-0020)、0.  4%(w/v)trypan blue(GibcoBRL15250-061)、血球计数盘与盖玻片、细胞冻存程序仪(也称为程序降温仪，品牌上海拓纷)
2.  冷冻保存方法：
(1)传统方法: 冷存管置于4 ℃10分钟--->-20 ℃30分钟--->-80 ℃ 16～18小时(或隔夜)--->液氮槽vaporphase长期储存。
-20 ℃不可超过1小时，以防止胞内冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80 ℃冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
(2)程序降温：利用已设定程序的等速细胞冻存程序仪以-1～-3 ℃/分钟之速度由室温降至(-80 ℃以下)-120 ℃，再放在液氮槽vaporphase长期储存。适用于悬浮型细胞与hybridoma之保存。
3.  步骤：
(1)冷冻前24-48小时更换半量或全量培养基，使细胞处于指数生长期。
(2)配制冷冻保存溶液(使用前配制)：另取一离心管，加入培养基、血清，逐滴加入二甲基亚砜 (DMSO)至20%浓度，即制成双倍的冻存液，置于室温下待用。
(3)离心收集培养之细胞，用加血清的培养基重悬起细胞，取少量细胞悬浮液(约0.  1 ml)计数细胞浓度及冻前存活率。
(4)取与细胞悬液等量的冻存液，缓慢逐滴加入细胞悬液，并晃动试管，制成细胞冻存悬液(DMSOzui后浓度为5～10%)，使细胞浓度为1～5×106cells/ ml，混合均匀，分装于已标示*之冷冻保存管中，1～2 ml/vial，并取少量细胞悬浮液作污染检测。严密封口后，注明细胞名称、代数、日期。然后进行冻存。

    程序控制冷冻装置俗称：程序降温仪，也称为程序冷冻仪、胚胎冷冻仪、细胞冷冻仪、程控降温仪；广泛用于冻存细胞、胚胎等。采用微机控制技术，软件，能较准确地控制液氮的施放量，从而保证被冻存的生物制品以适宜的冷冻速率降温冷冻。该仪器具有操作简便、人机界面清楚。 

  我国临床低温医学工作发展迅速，促进了移植医学的发展，特别是在骨髓、造 血干细胞、皮肤、角膜、内分泌腺体、以及血管和瓣膜等的冷冻保存和移植应用取 得了显著成绩。成功的造血干细胞移植依赖于造血干细胞活力的保存。生物样品在 降温冷冻过程中，当由液态向固态变化的相变期内会释放一定热量，使其温度回升， 不控制降温速率的冷冻过程将会导致组织细胞死亡。准确地测定生物样品的相变点， 用微机编制降温程序，以便在样品相变时加大液氮输入量，克服相变样品温度的回 升，使细胞安全而迅速地度过相变期，这是提高被冻样品成活率的关键环节。

 ☆主要技术指标☆
     温度控制范围:40℃~-180℃.
     温度精度:    误差<1℃
     降温速度:    0.1℃/分~50℃/分范围内可选
     升温速度:    0.1℃/分~30℃/分范围内可选

☆仪器结构☆:本仪器由以下四部分构成(标准配置):
温控系统：在机箱上配置高精度智能温控器，该温控器通过RS485通讯协议和电脑连接；
电脑软件：在电脑中运行上位机软件，即可设定控温程序，对箱体控温；
冷冻箱:  内外全不锈刚结构.冷冻容机不小于200*200*200毫米.可同时容纳冷冻管160个或血袋8个.
液氮罐及液氮加压器: 液氮加压器安装在30立升的液氮罐上,使罐内自增压,调节阀保持压力稳定.
☆软件功能☆
1、显示功能:
运行显示如图：.每步操作,每个功能都有屏幕显示.实时显示仪器工作状态﹑温度数据和曲线.

2、 编程功能:
可编制任意段数的用户程序.计算机按照用户程序控制冷冻过程.用户程序可方便地编制﹑修改﹑存储﹑调出.开机自动调出当前用户程序.
3、运行控制功能:
随机恒温功能: 可随时进入,随时解除恒温。
自动控制：设定程序后，可*自动运行。
手动控制: 程控时手控可参与控制.也可*手控。
4、数据处理功能
每次冷冻的全部数据和有关信息,都能自动形成一个数据文件存储下来;
温度数据和速度可按时间间隔列表或显示温度曲线.
可迅速方便地双向检索已存入的数据文件;
温度曲线可局部放大,便于研究关键段的细微变化;
还有一些功能恕不一一列出,这些功能如能配合使用,将为您的冷冻带来极大的方便.
5、软件升级
  随着公司软件不断的更新,用户可享受免费升级服务.
 
详细配置清单